YK011　Mouse C-Peptide I EIAキット

 

 

�T.  はじめに

 

Ｃ-ペプチドは、インスリン生合成前駆体であるプロインスリンの膵Ｂ細胞内でのプロセッシングによって生じる副産物です。インスリンと等モル比で血中に放出されるので、血中Ｃ-ペプチド濃度を測定することによって、膵Ｂ細胞のインスリンの分泌機能を推測することができます。Ｃ-ペプチドの半減期はインスリンのそれよりかなり長いという特徴を持っていることから、代謝が速いインスリンの代わりにＣ-ペプチドを測定することはインスリン分泌量をより正確に知るための指標となるところから、臨床上広く利用されています。Ｃ-ペプチドの測定は臨床的にはインスリン治療中の糖尿病患者のＢ細胞機能の評価（インスリン測定の代用）のみならず、低血糖状態の鑑別診断、高インスリン血症の鑑別診断、インスリン分泌総量の推定、膵摘出後の残存膵の有無の判定などにも応用されています。その他、インスリン受容体異常症や異常インスリン血症等インスリン代謝が大きく影響される病態では、Ｃ-ペプチドの測定はインスリンの測定よりはるかに重要となります。

また、長らく生理的活性がなく、ただインスリンの生合成副産物と考えられていたＣ-ペプチドについて近年の研究では、細胞の表面と特異的に結合し、Ca²⁺の細胞内への流入を促進し、MAP kinase、Na⁺、K⁺-ATPaseやeNOSを活性化するなどの結果が報告されています。動物実験ではさらに糖尿病合併症の予防、心臓の虚血・再灌流傷害の保護効果、1型糖尿病ラットにおける神経再生能力低下の防止、およびインスリン仲介細胞の成長促進や高濃度グルコースによる細胞アポトーシスの保護などが観測されています。これらの成果から、今後Ｃ-ペプチドの生理活性研究はかつてないほど注目されてくるものと予測されます。

当研究所ではすでにラットＣ-ペプチドの測定キットを開発しています。マウスもラットと同様、2種類のＣ-ペプチドが存在します。今回開発したマウスＣ-ペプチドの簡易測定キットは、マウスＣ-ペプチドIIとは反応しないIのみを認識する抗体を用い、ビオチン化マウスＣ-ペプチドIを標識抗原とすることにより、マウスの血清、血漿および尿中のＣ-ペプチドI濃度を特異的に測定することを可能にしました。本EIAキットはマウス体内のＣ-ペプチドIの変動を検討する上で、極めて有効に使用できます。
　さらに当研究所ではマウスＣ-ペプチドII簡易測定キットならびにマウスＣ-ペプチド（総Ｃ-ペプチド量）簡易測定キットを現在開発中です。

 

YK011　Mouse C-Peptide I EIAキット   ▼      0.617〜50 ng/mLの範囲で測定できます。 ▼　測定は16〜18時間（4℃）と2.5時間で 終了します。 　▼      42未知検体をduplicateで測定できます。 　▼      血清・血漿・尿サンプルの測定ができます。 　▼      検体量は25μLです。 　▼　プレートは一列（8ウエル）ずつ取り外しがで 　　　きますので、キットの分割使用が可能です。 ▼       同時再現性 CV(%) 　　 血清 3.1〜4.9血漿5.6〜7.5 尿3.4〜4.6 ▼       日差再現性 CV(%) 　　 血清 4.7〜8.8 血漿4.8〜8.1 尿5.3〜11.3   保存と安定性 　　2〜8℃で保存してください。製造日より 　　24ヶ月間は安定です。

内容     1）測定プレート 2）標準品 3）標識抗原 4）特異抗体 5）緩衝液 6）SA-HRP溶液 7）基質溶解液 8）OPD錠 9）酵素反応停止液 10)濃縮洗浄液 11)プレート密閉用シール

　　本製品は予告せずに仕様が変更される場合があります。

 
�U.  特徴
 

本キットはマウスの血清・血漿および尿に含まれるマウスＣ-ペプチドIを直接的且つ特異的に定量するためのキットです。操作は簡便でしかも特異性・定量性に優れ、共存する他の生理活性物質や体液成分の影響を受けにくいなど多くの利点があります。なお、添付の標準マウスＣ-ペプチドIは高純度合成品（純度98％以上）であり、表示の重量は絶対量を示しております。　

また、ビオチン化マウスＣ-ペプチドIは、HPLCにより精製したN^α-biotinylglycylglycyl mouse C-peptide Iを使用しています。
 

＜特異性＞
 

　本キットはマウスＣ-ペプチドIIと6.3％、マウスインスリンと6.5％、ラットＣ-ペプチドIと156.4％、ラットＣ-ペプチドIIと114.6％、ラットインスリンと7.4％の交差反応性が認められます。ヒトとイヌのＣ-ペプチドとの交差反応性は認められません。本キットでもラットＣ-ペプチドを測定することはできますが、標準品が異なりますので、ラットのサンプルを測定する場合、弊社のラットＣ-ペプチド測定キットYK010をご利用ください。

 
＜測定原理＞
 

　本キットは特異性の高いＣ-ペプチドIポリクロナール抗体を用いた競合法に、ビオチンとストレプトアビジンの非常に高い親和性を利用した測定法です。測定プレートの各ウエルには、ヤギ抗ウサギIgG抗体が固定化されています。この各ウエルに標準マウスＣ-ペプチドIまたは検体、ビオチン化マウスＣ-ペプチドIおよびウサギ抗マウスＣ-ペプチドIポリクローナル抗体を順次加えて競合反応させます。これにHRP(horse-radish peroxidase)結合ストレプトアビジンを加え、ウエル上にHRP結合ストレプトアビジン-ビオチン化抗原-抗体複合体を形成させます。最後にこの複合体中のHRP活性を測定することにより、検体中のマウス免疫活性Ｃ-ペプチドI濃度を求めることができます。
 

�V.  基本性能

 

＜測定範囲＞　有効測定範囲　0.617ng/mL〜50ng/mL

　　0.617ng/mLを下回るような低値の検体が予想される場合、検出限度としてさらに0.617ng/mLの標準液を3倍希釈し0.206ng/mLの標準液を設けることができます。この場合、0.206ng/mL〜0.617ng/mLの範囲の測定値の精度は上記有効測定範囲ほど高くはありませんので、概算値として使用してください。

 
＜標準曲線例＞

 

＜再現性＞

 

同時再現性　　ＣＶ（％）	血清	3.1〜4.9
	血漿	5.6〜7.5
	尿	3.4〜4.6
日差再現性　　ＣＶ（％）	血清	4.7〜8.8
	血漿	4.8〜8.1
	尿	5.3〜11.3

 
＜希釈試験（Dilution）＞

　　　　　　　　　　　　血清/血漿の場合（Low:標準品非添加、Mid & High:標準品添加）

　　　　　　　　　　　　　マウスの24時間収集した尿を10倍、30倍、90倍に希釈した場合。 
 
＜添加回収試験＞
 

	Added	Observed	Expected	Recovery (%)
Mouse serum No.1	0.00	1.97
	1.85	3.82	3.82	100.0
	5.56	8.60	7.53	114.2
	16.67	23.03	18.64	123.6
Mouse serum No.2	0.00	1.89
	1.85	3.73	3.74	99.7
	5.56	7.94	7.44	106.7
	16.67	22.22	18.55	119.8
Mouse serum No.3	0.00	2.32
	1.85	4.06	4.17	97.3
	5.56	8.40	7.87	106.7
	16.67	22.38	18.98	117.9
Mouse EDTA plasma No. 4	0.00	1.82
	1.85	3.64	3.67	99.2
	5.56	7.55	7.37	102.4
	16.67	22.95	18.49	124.1
Mouse EDTA plasma No. 5	0.00	1.75
	1.85	3.42	3.60	95.0
	5.56	7.87	7.31	107.7
	16.67	22.30	18.42	121.1
Mouse EDTA plasma No. 6	0.00	1.34
	1.85	3.15	3.19	98.6
	5.56	7.17	6.89	104.0
	16.67	19.73	18.01	109.6
Mouse EDTA plasma No. 7	0.00	1.71
	1.85	3.60	3.57	100.9
	5.56	7.53	7.27	103.5
	16.67	18.45	18.38	100.4

Mouse urine No.8	0.00	0.66
	1.85	2.47	2.51	98.4
	5.56	6.57	6.21	105.8
	16.67	19.17	17.32	110.7
Mouse urine No.9	0.00	1.25
	1.85	2.91	3.10	93.7
	5.56	6.83	6.80	100.4
	16.67	20.09	17.92	112.14
Mouse urine No.10	0.00	2.23
	1.85	3.59	4.08	88.0
	5.56	7.61	7.79	97.7
	16.67	22.34	18.90	118.2

注：尿サンプルは24時間で収集したマウスの尿を緩衝液で30倍に希釈してから添加回収試験に使用した。